Від яких ще умов залежить надійність результату РІА
Надійність правильності отриманого результату РІА зале- жить також від таких умов: крива залежності рівня зв’язування антитіл з міченим антигеном від концентрації антигену в пробі повинна співпадати з калібрувальною кривою. Якщо ці умови не виконуються, можна запідозрити, що на імунохімічну реакцію, якою є РІА, впливають фактори:Ветеринарна радіологія 356 А. Неспецифічного впливу на імунохімічну реакцію. • рН. Швидкість реакції “антиген-антитіло” і стабільність імунних комплексів звичайно не залежать від рН в інтерва- лі 7,0-8,5. Як правило, в дуже кислому або дуже лужному се- редовищі імунні комплекси дисоціюють, хоча деякі білки з основними властивостями найкраще взаємодіють з антиті- лами при рН 4,0-6,0. Тому для кожної системи РІА підбира- ють оптимальне рН. • Склад реакційної суміші також впливає на реакцію (анти- ген-антитіло). Енергія взаємодії антигену з антитілом змен- шується при високій концентрації солей у пробі чи в реак- ційній суміші. Деякі лікарські засоби (наприклад, гепарин) і бактерицидні препарати (тіомерсал) пригнічують імунохі- мічну реакцію. Тому для розведення стандартів і проб вико- ристовують той самий буферний розчин і враховують мож- ливі ефекти компонентів реакційної суміші. Б. Перехресна імунореактивність речовин з подібною будовою. 1. Гетерогенність молекулярних форм пептидних гормонів. • Пептидні гормони синтезуються у вигляді білків-поперед- ників, які перед викидом у кров проходять процесинг. При цьому утворюється одна або декілька форм гормону, які во- лодіють або не володіють біологічною активністю. Напри- клад, при процесингові секретину і ВІП (вазоактивного ін- тестинального пептиду) утворюється тільки одна біологічно активна форма гормону. Навпаки, гастрин, що синтезуєть- ся клітинами антрального відділу шлунку, поступає в кров як у вигляді зрілого гормону, що складається з 17 амінокис- лот, так і у формі біологічно активного попередника, який містить 34 амінокислоти. Обидва пептиди визначаються од- нією системою РІА. • На результати РІА впливають біологічно неактивні молеку- лярні фрагменти гормонів, такі як С-кінцевий фрагмент ПТГ (паратгормону). Концентрація цього фрагмента в сироватці в нормі перевищує концентрацію зрілого ПТГ (ПТГ1-84), а при хворобах нирок суттєво збільшується (навіть у хворих без вторинного гіперпаратиреозу). Оскільки для визначен- ня ПТГ звичайно використовують антитіла до С-кінцевого 357 фрагмента, правильна інтерпретація результату потребує оцінки функції нирок. Концентрацію ПТГ1-84 у плазмі можна визначити за до- помогою високочутливого імунорадіометричного методу, який базується на використанні двох різних антитіл: до С- і N-кінцевого фрагментів ПТГ. Антитіла до С-кінцевого фрагменту іммобілізують на полі- мерному носії. Потім додають проби або стандарти і мічені йодом-125 антитіла до N-кінцевого фрагмента ПТГ. Анти- тіла, мобілізовані на носієві, зв’язують як С-кінцевий фраг- мент, так і ПТГ1-84..Такий підхід використовують також в інших випадках, коли у пробі присутні молекулярні фраг- менти гормону. • У тварин різних видів первинні структури одного й того ж пептидного гормону можуть бути ідентичними. Але частіше вони відрізняються за однією або декількома амінокислота- ми. Амінокислотні заміни виникають у результаті мутацій і, як правило, локалізуються в ділянках молекули гормону, що не відіграють першорядної ролі в його біологічній активно- сті. Відмінності в первинній структурі визначають імуноре- активність гормону. 2. Гетерогенність інших сполук. • Лікарські засоби і наркотики. Речовини, які структурно подібні з препаратом, і його метаболіти можуть зв’язувати- ся або не зв’язуватися з антитілами. Якщо вимірюють вміст токсичного препарату, то необхідно знати, чи дана методи- ка виявляє тільки активну форму препарату. Навпаки, як- що треба довести вживання наркотику, то відмінності в іму- нореактивності між самим наркотиком і його метаболітами можна не враховувати. Таким чином, вимоги до специфіч- ності РІА залежать від мети аналізу. • Ферменти. РІА дозволяє вимірювати вміст ферменту, але не його активність. Інгібітори й активатори ферменту та при- сутність субстрату не впливають на результат. В одній і тій же системі можна визначати як сам фермент, так і профер- мент та інші неактивні форми ферменту. Залежно від мети дослідження, ці особливості методу можуть відігравати по- Методи радіоімунологічного аналізу358 зитивну або негативну роль, оскільки багато ферментів ма- ють видову специфічність, а біологічна активність ферменту не обов’язково корелює з його імунохімічною реактивністю. Тому РІА треба розглядати як доповнення до методу аналізу ферментів, який ґрунтується на їх активності, а не як підмі- ну цих методів.
Ви переглядаєте статтю (реферат): «Від яких ще умов залежить надійність результату РІА» з дисципліни «Ветеринарна радіологія»
