Які загальні принципи розділення зв’язаної і вільної фракцій міченого ліганда при виконанні процедури радіотестування in vitro
Після завершення інкубації реакційної суміші при виконан- ні процедури радіотестування in vitro комплекс “мічений ліганд- зв’язуючий реагент” необхідно відділити від незв’язаного мічено- го ліганда. Всі способи розділення цих двох фракцій базуються на фізико-хімічних відмінностях їх властивостей. Основними крите- ріями для вибору способу розділення є ефективність і практич- ність. Під ефективністю мають на увазі повноту відділення ком- плексу від вільного ліганда. В ідеальному випадку ефективність повинна бути близька до 100%. Практично якась частина мічено- го ліганда завжди буде виявлятися у фракції зв’язаного ліганда навіть у відсутності зв’язуючого реагенту. Причини такого впли- ву наступні: 1) фізичне захоплення вільного ліганда комплексом “зв’язую- чий реагент-ліганд” (наприклад, внаслідок випадання вільного лі- ганда в осад, що утворюється); 2) присутність в міченому ліганді домішок, близьких за хіміч- ними властивостями до комплексу “зв’язуючий реагент-ліганд”; 3) адсорбція вільного ліганда на стінках пробірки; 4) неповне розділення вільного і зв’язаного ліганда через од- накову здатність до осадження; 5) неповне осадження комплексу мічений “ліганд-зв’язуючий реагент”, що часто має місце при використанні в РІА методу под- війних антитіл; 6) мічений ліганд може містити домішки, які не реагують зі зв’язуючим агентом і внаслідок цього виявляються у вільній фазі (наприклад, вільний йодид); 7) процес розділення може викликати дисоціацію комплексу (наприклад, при використанні методу розділення, при якому віль- ний ліганд адсорбується на вугіллі, а зв’язаний залишається в роз- чині); розділенню може заважати той факт, що активоване вугілля здатне конкурувати зі зв’язуючим агентом за ліганд і “відривати” таким чином ліганд від комплексу.
Ви переглядаєте статтю (реферат): «Які загальні принципи розділення зв’язаної і вільної фракцій міченого ліганда при виконанні процедури радіотестування in vitro» з дисципліни «Ветеринарна радіологія»
