Статистика
Онлайн всього: 15 Гостей: 15 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
Цитокиновый иммунный ответ в зависимости от интенсивности инвазии у больных хроническим описторхозом
|
| 08.11.2014, 11:32 |
| Известно, что протекающий годами и десятилетиями хронический описторхоз, вызванный Opisthorchis felineus, приводит к существенным изменениям в иммунном ответе хозяина. Наиболее типичным для описторхоза является супрессия Т-клеточного звена, и повышение числа В-лимфоцитов [4]. Показано, что степень изменений показателей иммунного ответа при данном гельминтозе, как правило, коррелирует с тяжестью течения заболевания [4], однако исследования цитокинового иммунного ответа у больных описторхозом в зависимости от интенсивности инвазии до сих пор не проводилось.
Цель настоящей работы заключалась в изучении особенностей цитокинового иммунного ответа в условиях in vitro на специфические паразитарные антигены, микобактериальный антиген и неспецифические митогены у больных хроническим описторхозом, имевших различную интенсивность инвазии.
Материалы и методы. Проведено обследование 46 больных хроническим описторхозом в стадии обострения (возраст 32,8 ( 10,4 лет). Диагноз был подтвержден копроовоскопически. Интенсивность инвазии определяли по методу Столла [1]. В зависимости от интенсивности инвазии все больные были распределены на две группы. Группу I (21 человек), имевшую низкую интенсивность инвазии (до 1000 яиц/г фекалий), и группу II (25 человек), у которой была выявлена высокая интенсивность инвазии (более 1000 яиц/г фекалий). Контрольная группа включала 23 клинически здоровых лиц, не имевших описторхоз, а также другие гельминтные инвазии и вирусные гепатиты В или С (возраст 35,1 ( 6,8 лет). В проведенных нами исследованиях использовался яичный антиген (ЯАГ) и соматический (САГ) описторхов, который получали в соответствии с методом, описанным А.Т. Котелкиным с соавт. [3].
Для получения культур мононуклеарных клеток использовали гепаринизированную венозную кровь (20 МЕ/мл). Мононуклеары получали центрифугированием лейковзвеси на градиенте плотности фиколл-верографина («Pharmacia», Швеция) по методу M. Jondal с соавт. [9]. Клетки отмывали культуральной средой и культивировали в 24-луночных плоскодонных планшетах при температуре 37 (С и при концентрации СО2 5(. В каждую лунку вносился 1 мл полной культуральной среды RPMI-1640 с добавлением 10( инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, гентамицина 80 мкг/мл, 0,3 мг/мл L-глутамина, 5 мМ HEPES-буфера), содержащей около 2(106 клеток/мл. Для стимуляции мононуклеарных клеток использовали специфические антигены описторхов (ЯАГ и САГ) в дозе 20 мкг/мл, микобактериальный антиген (МАГ, очищенный белковый дериват туберкулина, «Sigma», США) в дозе 5 мкг/мл, а также митоген конконавалин-А (Кон-А, «Sigma», США) в дозе 20 мкг/мл. Уровни продукции интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-4 (IL-4) и интерферона-( (IFN-() мононуклеарными клетками оценивали через 72 часа по накоплению этих цитокинов в культуральных супернатантах с помощью твердофазного иммуноферментного метода в соответствии с инструкциями, предлагаемыми производителем тест-систем (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург).
Различия в уровнях накопления цитокинов в культуральных супернатантах были проанализированы с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Для выявления зависимостей между изучаемыми параметрами проводили ранговую корреляцию Спирмена [2].
Результаты и обсуждение. В ходе проведенного исследования нами было установлено существенное повышение продукции мононуклеарами IL-4 после стимуляции САГ или ЯАГ у больных описторхозом (p<0,01), имевших различную интенсивность инвазии (группы I и II), по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (таблица 1). Кроме того, установлено, что уровни продукции IL-4 у больных описторхозом с высокой интенсивностью инвазии (группа II) были достоверно выше, по сравнению с соответствующими уровнями у больных из группы I, имевших относительно низкую интенсивность поражения гельминтами (p = 0,009 для ЯАГ и p = 0,02 для САГ). Стимулированная с использованием митогена Кон-А продукция IL-4 в культурах мононуклеаров, полученных от больных описторхозом из группы II, была также существенно выше, чем в контрольной группе (p = 0,006).
Стимуляция культур мононуклеаров специфическими описторхозными антигенами, МАГ или митогеном Кон-А у больных хроническим описторхозом (группы I и II) приводила к значительному повышению уровня продукции IL-10, по сравнению с соответствующими уровнями в супернатантах, полученных от здоровых людей (p < 0,01). Наиболее высокие уровни продукции IL-10 были определены в стимулированных ЯАГ или САГ культурах мононуклеарных клеток, полученных от больных хроническим описторхозом, имевшим высокую интенсивность инвазии (группы II), по сравнению с соответствующими показателями в группе I (p = 0,003 для ЯАГ и p = 0,005 для САГ). Сходные достоверные различия были выявлены в уровнях продукции IL-10, стимулированной Кон-А или МАГ, в культурах мононуклеаров, полученных от больных из групп I и II (p = 0,005 для Кон-А и p = 0,003 для МАГ).
С другой стороны, уровни продукции IFN-γ мононуклеарными клетками, стимулированной специфическими описторхозными антигенами, МАГ или Кон-А у больных описторхозом, имевшим высокую интенсивность инвазии (группа II), были существенно ниже, чем в контрольной группе (p < 0,01). Вместе с тем, уровни продукции IFN-γ после стимуляции специфическими описторхозными антигенами, МАГ или Кон-А, в супернатантах культур, полученных от больных из группы I, существенно не отличались (p > 0,05) от содержания этого цитокина в культурах, полученных от здоровых людей. Уровни содержания IFN-γ в супернатантах культур, стимулированных ЯАГ, САГ, МАГ или Кон-А у больных с высокой интенсивностью инвазии (в группе II), были достоверно ниже, чем у больных из группы I (p < 0,01).
У больных хроническим описторхозом продукция мононуклеарами IFN-γ, стимулированная специфическими описторхозными антигенами, обратно коррелировала с содержанием IL-10 (для ЯАГ r = - 0,57, p <0,001; для САГ r = - 0,65, p < 0,001 соответственно). Положительные корреляционные связи были выявлены между уровнями стимулированной описторхозными антигенами продукции IL-10 в супернатантах культур мононуклеаров и интенсивностью инвазии (для ЯАГ r = 0,72 при p < 0,001; для САГ r = 0,68 при p < 0,001).
Механизмы иммунного ответа при гельминтозах до сих пор изучены не достаточно. Экспериментальные исследования на примере модели шистосомозной инвазии показали, что в ранний период заболевания характерно доминирование ответа Тh-1, в то время как при хронизации инфекции начинает преобладать ответ Тh-2 [5]. Эти изменения, по-видимому, опосредованы IL-10-зависимым механизмом [7]. Известно, что IFN-γ является маркером ответа Тh-1, а IL-4 рассматривают как один из основных цитокинов ответа Тh-2. Кроме того, в настоящее время IL-10 считается цитокином с иммуномодулирующими свойствами, способным подавлять активацию Th-1 и Тh-2 [6].
В эксперименте на животных, зараженных другим видом описторхид (Opisthorchis viverrini), было показано, что хроническая стадия инвазии сопровождается значительным повышением продукции IL-4, IL-5 и IL-10 и одновременным подавлением секреции IFN-γ, что также свидетельствовало о доминировании ответа Тh-2 [8]. В настоящей работе в ходе изучения профиля цитокинового ответа у людей, больных хроническим описторхозом, вызванным O. felineus, нами были получены сходные результаты. Положительная корреляционная связь между стимулированной продукцией IL-10 мононуклеарами и интенсивностью инвазии прежде была отмечена у больных шистосомозом [11]. По-видимому, повышенные уровни секреции иммуномодулирующего цитокина IL-10 у больных с высокой интенсивностью инвазии могут способствовать ограничению чрезмерного иммунного ответа Тh-2 и развитию связанной с ним патологии [10].
Вывод. Уровни стимулированной продукции цитокинов мононуклеарными клетками в условиях in vitro у больных хроническим описторхозом коррелируют с интенсивностью инвазии. Наиболее высокий уровень продукции мононуклеарами IL-4 и IL-10, а также наиболее выраженное подавление секреции IFN-γ характерно для больных, имевших высокую интенсивность инвазии, что свидетельствует о доминировании ответа Тh-2.
|
| Категорія: Актуальні проблеми інфекційної патології | Додав: koljan
|
| Переглядів: 465 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
