Статистика
Онлайн всього: 1 Гостей: 1 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
Методи ідентифікації пухлинних антигенів
|
| 27.09.2014, 17:11 |
| Згідно з сучасними уявленнями, певну субстанцію
можна назвати пухлинним антигеном, якщо вона продукується пухлинною клітиною і розпізнається
специфічними ефекторними Т-клітинами та/чи антитілами. З урахуванням цього розроблено методи
ідентифікації пухлинних антигенів.
Антигени пухлин, які розпізнаються Т-лімфоцитами, можна виявити ідентифікацією пептидів, які
розпізнаються пухлиноспецифічними ЦТЛ, чи генів, які кодують ці пептиди. В обох випадках
ідентифікацію антигенних пептидів на поверхні клітини проводять за допомогою клонових ліній
ЦТЛ, які отримують з лімфоцитів периферичної крові пацієнта чи з лімфовузлів, що дренують
пухлину, кокультивуючи їх з пухлинними клітинами і стимулюючи ІЛ-2. Зазначимо, що пухлинні
антигени, які розпізнаються ЦТЛ, є невеликими пептидами, що процесуються з клітинних білків і
представляються в комплексі з молекулами МНС І.
Для ідентифікації антигенів пухлин, які розпізнаються Т-лімфоцитами, використовують два підходи
– прямий і непрямий.
Прямий, біохімічний, підхід полягає у виділенні пептидів, зв'язаних з МНС І пухлинних клітин (у
буфері з низьким рН), фракціонуванні суміші їх за допомогою високороздільної рідинної
хроматографії зі зворотною фазою (high-perfoтапсе liquid chromatography-HPLC) з наступним
тестуванням отриманих пептидних фракцій на здатність сенсибілізувати непухлинні клітини з
відповідними МНС І до лізису пухлиноспецифічними клонами ЦТЛ. Пептидні фракції, які
індукували лізис цих клітин ЦТЛ, аналізують за допомогою методу масспектроскопії, визначають їх
амінокислотну послідовність і, порівнюючи її з даними про амінокислотну послідовність відомих
білків, ідентифікують пептид пухлинного антигену.
Основою непрямого, генетичного, підходу ідентифікації пухлинних антигенів є молекулярне
клонування генів, що кодують ці антигени. Він полягає у приготуванні кДНК-бібліотек з клітин
пухлин та молекулярних конструктів генів бібліотеки, які сприяють експресії цих генів при внесенні
в лінії клітин. Пулами ДНК таких бібліотек трансфекують нормальні клітини, ідентичні з
пухлинними за алелями МНС І, і тестують трансфековані клітини на чутливість до лізису
специфічними ЦТЛ. Якщо клітини лізуються ЦТЛ, то це свідчить про те, що привнесені гени
кодують антигенні пептиди, які розпізнаються ЦТЛ.
Унаслідок багатьох таких послідовних трансфекцій, в яких використовують все більш обмежений
набір фракцій пулу ДНК, виділяють окремі гени, які кодують антигени пухлин, і проводять
ідентифікацію їх, порівнюючи з генами відомих антигенів.
Біохімічний і генетичний підходи були успішно застосовані для виявлення антигенів меланоми, які
індукують ЦТЛ-залежну відповідь у хворих з цією пухлиною.
Антитіла, на відміну від Т-клітин, розпізнають пухлинні антигени в нативній конформації
незалежно від молекул МНС, зв'язуючись як з пептидними, так і з непептидними епітопами.
Пухлиноспецифічні антитіла виявляються в сироватці крові онкологічних хворих. З урахуванням
цього розроблено стратегію пошуку пухлинних антигенів, яку назвали SEREX (serological analysis
of recombinant cDNA expression libraries). Технологія SEREX полягає у виділенні з пухлинної
тканини пулу загальної мРНК, створенні з нього фагової ДНК-експресуючої бібліотеки антигенів
пухлини з наступним інфікуванням отриманими фагами Е.соlі. Продуковані бактеріями різні
антигени пухлинних клітин досліджують на реактивність із сироваткою хворого–донора пухлини і
сироватками хворих з подібною патологією на наявність специфічних до пухлинних антигенів
антитіл. За SEREX-технологією було визначено кілька антигенів пухлин, як відомих, так і
невідомих, зокрема карциноми стравоходу і меланоми (Nr-ESO-1, HOM-MEL-40, MAGE-1). |
| Категорія: Імунологія | Додав: koljan
|
| Переглядів: 561 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
