Статистика
Онлайн всього: 11 Гостей: 11 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
Фрагментація ензимами
|
| 25.09.2014, 13:11 |
| У 1959 р. Р. Портер, досліджуючи розщеплення кролячого IgG (який
містить лише один дисульфідний зв'язок між важкими ланцюгами) протеолітичним ферментом
рослинного походження папаїном за наявності цистеїну, виявив зниження його молекулярної маси з
7S до 3,5S. Під час діалізу цього матеріалу порівняно з фосфатним буфером і фільтрування на
колонці з карбоксиметилцелюлозою (рН = 5,2) було отримано три піки — фрагменти І, II, III, що
мали молекулярну масу по 50 000. З них 2/3 становили фрагменти І і ІІ, а 1/3 — фрагмент III.
Фрагменти І і II мали активність моновалентних антитіл, тобто зв'язували антиген (Fab), а фрагмент
III антиген не зв'язував (Fc). Пізніше А. Нісонов зі співробітниками (1960) розщепили кролячий IgG
пепсином за відсутності цистеїну і довели, що молекулярна маса отриманого продукту знижується
до 100 000. Цей продукт мав активність двовалентних антитіл. Під дією бромціану молекула IgG
розщеплювалася на велику кількість пептидів.
Використовуючи для руйнування міжланцюгових дисульфідних містків цистеїн за наявності
сечовини або гуанідину, Д. Едельман зі співробітниками (1960) показали, що в разі руйнування S —
S-зв'язків молекулярна маса γ-ґлобулінів знижується зі 150 000 до 50 000, а при хроматографічному
дослідженні матеріалу було виявлено компоненти з молекулярною масою 25 000. Це дало змогу
стверджувати, що молекула кролячого IgG має складатися з чотирьох ланцюгів — двох по 50 000 і
двох по 25 000. У 1962 p. P. Портер на основі даних розщеплення кролячих імуноглобулінів
меркаптоетанолом запропонував схему структури IgG, згідно з якою молекула імуноґлобулінів
складається з чотирьох ланцюгів — двох важких Н (hard) і двох легких L (light). Важкі ланцюги
сполучені між собою та з легкими ланцюгами дисульфідними зв'язками. Зв'язки між важкими
ланцюгами локалізуються приблизно посередині, в ділянці, яку називають шарнірною. Вона
відрізняється відносно лабільною структурою, зумовлює гнучкість молекули, можливість обертання
окремих її субодиниць і характеризується високою чутливістю до протеолітичних ферментів. У разі
розщеплення IgG папаїном у шарнірній ділянці молекула імуноглобуліну розпадається на три
фрагменти — два однакових Fab-фраґменти, які складаються з легкого і приблизно половини
важкого ланцюга, сполучених S —S-зв'язком, і один Fc-фраґмент, що складається з двох половинок
важких ланцюгів, сполучених S —S-зв'язком (мал. 36). За допомогою аналізу амінокислот у важких
і легких ланцюгах імуноґлобулінів виявлено константні частини, що характеризуються сталістю
амінокислотного складу, і варіабельні, яким притаманна значна мінливість амінокислот. За складом
і послідовністю амінокислот у константній частині важких ланцюгів розрізняють імуноґлобуліни
п'яти класів: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
|
| Категорія: Імунологія | Додав: koljan
|
| Переглядів: 617 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
