Статистика
Онлайн всього: 5 Гостей: 5 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
ВЛИЯНИЕ АНТИГЕНОВ TOXOCARA CANIS НА МОРФОЛОГИЮ ОРГАНОВ МЫШЕЙ
|
| 08.11.2014, 13:28 |
| В городской популяции собак и кошек среди инвазионных заболеваний наиболее часто встречается токсокароз. По нашим данным собаки, принадлежащие частным лицам, заражены Toxocara canis на 11,34%, содержащиеся в приютах – на 26,42%, домашние и содержащиеся в приютах кошки заражены Toxocara cati на 12,13% и 39,58%, соответственно. Широкому распространению данной инвазии способствует цикл развития гельминта без участия промежуточного хозяина и высокая устойчивость яиц паразита во внешней среде. В последние годы идет активное изучение патогенеза при гельминтозах и способов его коррекции. Известно, что во время паразитирования, особенно в период миграции или линьки личинок, а также при дегельминтизации, в кровяное русло организма хозяина поступает огромное количество соматических и метаболических продуктов гельминта. Данные продукты представляют собой комплекс белков, антигенов, ферментов и других биологически активных веществ, которые могут вызывать развитие разнообразных патологий.
Целью нашей работы было выявление микроморфологических изменений в органах лабораторных животных, вызванных интраперитонеальным введением антигенов гельминтов.
Материалы и методы. Материалом для эксперимента служили половозрелые T.canis, выделенные от спонтанно инвазированных собак. После обработки растворами антибиотиков гельминтов использовали для приготовления экстрактов путем многократного замораживания и оттаивания, гомогенизации и экстрагирования при температуре +4°С в течение 24 часов в стерильном забуференном физиологическом растворе (рН 7,2) с последующим центрифугированием биоматериала при 10000 об/мин. Также использовали в качестве антигена метаболиты, полученные при культивировании яиц и личинок T.canis. Для этого выделенных от спонтанно зараженных животных гельминтов обрабатывали по описанной выше методике. Самок нематод вскрывали, извлекали матку с яйцами, которые культивировали в жидкой питательной среде 199 с добавлением 5% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (Perbio) при температуре +37°С в течение 7 дней. Затем метаболиты собирали, очищали центрифугированием и замораживали при температуре -10°С для дальнейшего использования. В каждой партии биоматериала определяли содержание белка и проверку на стерильность.
Изучение патогенного действия антигенов проводили на нелинейных белых мышах – самцах, массой 18-22г путем однократной внутрибрюшинной иммунизации в дозе 100 мкг белка на животное. Первой контрольной группе вводили 0,1мл забуференного физиологического раствора, второй – такую же дозу питательной среды. Убой мышей проводили через 4, 12, 24, 48 и 72 часа после иммунизации (п/и) методом цервикальной дислокации. Печень, селезенку, красный костный мозг грудины и семенники исследовали с применением гистологического метода. Для этого их фиксировали 10%-ным нейтральным формалином, обезвоживали проводкой в спиртах возрастающей крепости, заливали в парафиновые блоки и готовили срезы толщиной 4-5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином и по ван-Гизону. Окрашенные срезы Просмотр готовых препаратов производили с помощью микроскопа фирмы “Leica” и “Zeiss” при увеличении окуляра х10, с объективами х4, х40 и х100 с подробным описанием имеющейся морфологической картины в органах. Оценивали дисциркуляторные, дистрофические, склеропластические, воспалительные, гиперпластические, регенераторные процессы в органах.
Результаты. Состояние лабораторных животных оставалось удовлетворительными на протяжении всего периода проведения эксперимента. Гистологическое исследование внутренних органов позволило выявить следующие изменения. Под воздействием соматического экстракта токсокары в состоянии печени изменения появлялись уже через 4 часа п/и в виде расширения и полнокровия венозных сосудов, особенно центральных. Впоследствии подобные дисциркуляторные изменения приобрели более выраженный характер и достигли максимального уровня спустя 48-72 часа п/и. Начиная с 12 часа п/и отмечали белковую дистрофию гепатоцитов, которая просматривалась более отчетливо в периферических отделах долек. Кроме того, в разных отделах долек и в портальных трактах обнаруживали скопления зрелых лимфоцитов, которые укрупнялись к 24-48 часам, затем отмечали тенденцию к уменьшению их размеров. В селезенке изменения происходили на уровне красной пульпы. Уже через 4 часа п/и было выражено полнокровие фолликулов, некоторые из них сливались между собой. В субкапсулярном слое и в перифолликулярной зоне определяли наличие одиночных многоядерных гистиоцитов, их групп (через 24-48 часов п/и). Таким образом, в печени и селезенке происходили характерные изменения, свидетельствующие о формировании адекватного иммунного ответа. В красном костном мозге грудины отмечали активацию миелоидного и лимфоидного ростков. Тромбоцитарный росток оставался интактным на протяжении всего опыта. При гистологическом исследовании ткани семенников при относительном сохранении стратификации слоев сперматогенного эпителия отмечали угнетение сперматогенеза в отдельных канальцах, в основном, расположенных по периферии органа. В строме и наружной оболочке – умеренный отек. Под влиянием экскреторно-секреторных продуктов Т.canis происходили изменения, как в структуре семенников, так и печени и селезенки лабораторных мышей. В семенниках отмечали отек капсулы и межканальцевой стромы при сохранении строения сперматогенного эпителия. Сперматогонии и сперматобласты находились в состоянии дистрофии. Сперматогенез был неравномерно выражен в разных канальцах, интенсивность его несколько снижена. Через 12 часов п/и в семенных канальцах находили сперматозоиды с бледно окрашенными ядрами, а вокруг самих канальцев отмечали крупные скопления клеток воспалительного ряда (макрофаги, плазмоциты, эозинофилы, нейтрофилы). Впоследствии через 48-72 часа п/и отмечали активизацию сперматогенеза при сохранении дистрофических процессов, однако семявыносящие протоки оставались преимущественно пустыми. Следовательно, при относительной активизации сперматогенеза он заканчивался образованием неполноценных половых продуктов.
Изменения происходили и в других органах, в частности, в селезенке. Отмечали полнокровие красной пульпы, крупные клеточные фолликулы. В красной пульпе субкапсулярно и вокруг фолликулов располагались группы моно- и полинуклеарных гистиоцитов, которые впоследствии стали преобладать. Через 12 часов п/и отмечали оживление Т-клеточного иммунного звена. Через двое суток после введения антигена в красной пульпе появились клетки – мононуклеары с крупными гиперхромными ядрами. Максимальные изменения отмечали через 12-24 часа п/и, затем их интенсивность пошла на снижение, однако активацию Т-клеток наблюдали на протяжении всего периода эксперимента.В красном костном мозге выявляли преобладание миелоидного ростка, значительное количество мегакариоцитов. В печени также были выявлены как дисциркуляторные, так и дистрофические изменения. Через 24 часа п/и появившиеся первоначально мелкие группы зрелых лимфоцитов трансформировались в крупные, вплоть до появления очаговых лимфоидноклеточных инфильтратов. К концу периода наблюдений лимфоциты выявляли в печени единично, либо в составе небольших скоплений, что свидетельствует о стремительном развитии иммунного ответа, вызванного однократным введением продуктов метаболизма личинок Т.canis, и быстрым его угасанием.
Выводы. Таким образом, наши исследования позволили установить, что экстракт имаго и метаболиты личинок T.canis при однократном интраперитонеальном введении лабораторным мышам вызывают развитие быстрого и адекватного иммунного ответа, стимулируя пролиферацию клеток РЭС, индуцируют воспаление в печени и селезенке, а также обладают способностью подавлять сперматогенез. Следовательно, при инвазии животных токсокарозом оказывается негативное влияние, как на иммунитет, так и на функцию размножения. Таким образом, проявляется регулирующая функция гельминтов в отношении популяции хозяина.
|
| Категорія: Актуальні проблеми інфекційної патології | Додав: koljan
|
| Переглядів: 471 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
