Статистика
Онлайн всього: 12 Гостей: 12 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
Streptococcus pyogenes, как фактор инициации нестабильности генома при ангине стрептококковой этиологии
|
| 08.11.2014, 13:11 |
| Заболевания, вызванные стрептококком группы А (СГА), широко распространены во всем мире, а ангина среди стрептококкозов по частоте регистрации занимает первое место [11]. Формирование рецидивирующего течения и развитие осложнений, несмотря на проводимую этиотропную терапию позволяет предполагать наличие еще не изученных патогенетических механизмов в инфекционном процессе при стрептококковой ангине. Согласно современным представлениям ведущую роль в развитии заболевания играет нестабильность генома (НГ), которая проявляется различными нарушениями генетического аппарата [7]. Предполагается [13], что в формировании НГ участвуют несколько механизмов, три из них наиболее значимы – повышение интенсивности эндомутагенеза в клетках организма, снижение эффективной работы геномпротекторных систем и накопление в периферической крови клеток с повреждениями в генетическом аппарате.
Данные механизмы представляет собой сложный, мультикомпонентный процесс, реализующийся поэтапно в различные периоды заболевания. Уже на этапе рецепции, адгезии и колонизации на макроорганизм воздействуют метаболиты стрептококка (стрептолизин, стрептокиназа, дезоксирибонуклеаза, протеазы, эритрогенные токсины типа А, В и С и др.). Некоторые из них обладают выраженной мутагенной активностью [7,8].
Цель исследования. Оценка цитогенетическими методами состояния генома соматических клеток у больных стрептококковой ангиной и изучение мутагенной активности экстракта и живой культуры Streptococcus pyogenes в модельных системах.
Материалы и методы. Обследовано 190 больных стрептококковой ангиной в возрасте от 15 до 56 лет. Группа здоровых составили - 96 чел. Заболевание регистрировалось одинаково часто как у мужчин, так и у женщин. С увеличением возраста отмечалось уменьшение количества больных. Этиологическим фактором заболевания у 89,8%, обследованных больных явился Str. pyogenes, у 10,2% больных - Staphylococcus aureus+ Str. pyogenes – с преобладанием стрептококка. Первичная и рецидивирующая формы ангины регистрировались в равном количестве случаев, по характеру местного процесса преобладала лакунарная ангина. При лакунарной ангине преимущественно наблюдалась среднетяжелая, при фибринозно-некротической - тяжелая форма заболевания.
Обследование проводилось в острый период – (2-4 день болезни) при поступлении больного в стационар, в период ранней (7-10 д.б.) и поздней (30-31 дни начала заболевания) реконвалесценции и включало клиническое наблюдение и цитогенетические методы исследования. С целью изучения состояния генома у больных ангиной использовался метод регистрации количества эритроцитов с микроядрами (ЭМ) и лимфоцитов с хромосомными аберрациями (ХА) в периферической крови человека.
Для регистрации эритроцитов с микроядрами [3,12] просматривали 1-2 мазка периферической крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. В мазках крови подсчитывали не менее 20 тысяч эритроцитов, что позволяло проводить исследования в группах с малой выборкой. Учет лимфоцитов с хромосомными аберрациями у больных ангиной и здоровых осуществляли по протоколу методики Н.П. Бочкова и соавт. [1]. У каждого обследуемого просматривали по 300 метафаз. Полученные данные (в %) сравнивали между группами здоровых и больных ангиной.
В условиях эксперимента проведена регистрация перестроек хромосом в клетках меристемы семян высшего растения Crepis capillaries (скерда) [4].и анализ микроядер в нормохромных эритроцитах периферической крови мышей [12].при действии экстракта и живой культуры Streptococcus pyogenes. Экстракт (ЭК) был приготовлен из штамма Streptococcus pyogenes «Гусев» музейной коллекции НИИ уха, горла и носа (г. Москва) путем дезинтегрирования и центрифугирования в иммунологической лаборатории Казанского НИЭМ. Живая культура (ЖК) Streptococcus pyogenes выделена из материала с миндалин от больного лакунарной ангиной в бактериологической лаборатории Казанской РКИБ.
Результаты. Динамика содержание МЯ в эритроцитах ХА в лимфоцитах крови больных стрептококковой ангиной. Результаты исследования показали, что в острый период заболевания имеет место достоверное повышение уровня ЭМ в периферической крови (0,17+0,02%) по сравнению с группой здоровых лиц (0,11+0,01%), р<0,05, у больных первичной и рецидивирующей формами ангины. К периоду ранней реконвалесценции (7-10 дни от начала болезни) число ЭМ возрастало (0,23+0,03%) и с высокой достоверностью (р<0,01) отличалось от показателей здоровых лиц и данный показатель оставался достоверно высоким через месяц после перенесенного заболевания (0,14+0,02%).Исследование количества лимфоцитов с ХА в периферической крови пациентов с ангиной показало их резкое отличие от таковых у здоровых. У больных с ангиной до лечения число аберрантных лимфоцитов в периферической крови было равно 5,22(0,63% и превышало количество лимфоцитов с ХА у людей из группы здоровых (2,00(0,57%) в 2,61 раза, свидетельствуя о нестабильности генома. На 7-10 день от начала лечения наблюдалось увеличение количества лимфоцитов с ХА (6,11(0,53%, р<0,05 ) и незначительное снижение на 30-31 дни от начала заболевания, но оставалось в 2,5 раза выше, чем у здоровых. Полученные результаты свидетельствуют о нестабильности генома у больных ангиной [9].
Способность ЭК и ЖК Streptococcus pyogenes интенсифицировать уровень кластогенеза в клетках семян Crepes capillaries. Результаты экспериментальных исследований показали, что ЭК и ЖК гемолитического стрептококка обладают кластогенной активностью. Наибольшее количество аберраций хромосом регистрировалось при обработке семян ЭК и ЖК в концентрации 375 мкг/мл (3,97±0,74, Р <0,001) и 1,0 тыс.ед. КОЭ (2,75±0,61, Р <0,05) соответственно. Дальнейшее повышение концентраций не приводило к возрастанию эффекта. Это может быть связано с наличием у испытуемого образца не только кластогенной, но и антикластогенной активности и токсичности. В этом случае, при повышении концентраций параллельно с возрастанием кластогенного действия будет увеличиваться токсический или антикластогенный эффект, и в определённый момент последние могут перекрыть кластогенный. Следует также учитывать, что характер зависимости концентрация-эффект может определяться и метаболическими особенностями клеток-мишеней. Однако в любом случае наши данные дают возможность предположить, что исследуемые нами ЭК и ЖК являются сложными многокомпонентными смесями, которые способны индуцировать в клетках и организме несколько взаимосвязанных биологических ответов.
Анализ перестроек хромосом показал, что они относятся в основном к хроматидному типу. Хромосомных аберраций было примерно в три раза меньше. Поскольку по протоколу нашего опыта обработка клеток биосубстратами осуществлялась в начале предсинтетической стадии, то в соответствии с теорией возникновения мутаций [5] можно предположить, что часть первичных нарушений сохранялась в ДНК как потенциальные повреждения и, достигая фазы S, реализовались в видимые хроматидные аберрации. Это поставило вопрос о способности ЭК и ЖК индуцировать в клетках семян скерды повреждения, которые могут сохраняться не только в одном клеточном цикле, но и переходить в другой. Это явление, названное "продлённым мутагенезом", обнаружено у растительных и животных объектов [5], а также в клетках человека [2, 10]. Продлённый мутагенез исследовался на семенах скерды путём сравнительного анализа уровней индуцированных изолокусов со слиянием и концевых хроматидных делеций в первом и втором митозе, при обработке клеток ЭК в фазе G1 первого клеточного цикла. По мнению [5], появление этих перестроек во втором митозе в количестве более 50% от появившихся в первом свидетельствует о заново возникших аберрациях. Результаты опыта показали, что относительное число изолокусов со слиянием и концевых хроматидных делеций во втором митозе по сравнению с первым было соответственно 90,9% и 83,6%, что существенно перекрывало теоретически ожидаемый уровень переживания этих мутаций.
Динамика содержания микроядер (МЯ) в периферической крови мышей при обработке их ЭК и ЖК Streptococcus pyogenes в остром опыте. На протяжении первых трёх суток после введения ЭК и ЖК уровень МЯ в эритроцитах мышей колебался, но достоверно не превышал контрольных показателей. На 4 и 5 сутки отмечалось достоверное повышение числа МЯ. На седьмые и последующие сутки (16 сутки) уровень микроядер снизился до контрольных значений. С учетом полученных данных и принимая во внимание общности происхождения и генетическое единство живого, можно предположить, что формирование НГ при ангине, обусловленной Streptococcus pyogenes, является сложным, мультифакториальным, многоэтапным процессом, где, в первую очередь, необходимо учитывать влияние инфекта.
|
| Категорія: Актуальні проблеми інфекційної патології | Додав: koljan
|
| Переглядів: 518 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
