Статистика
Онлайн всього: 8 Гостей: 8 Користувачів: 0
|
 |
Матеріали для курсової |
Определение ВГС-РНК с помощью ПЦР
|
| 31.10.2014, 10:05 |
| На рис. 24 отчетливо видно, что благодаря определению ВГС-РНК (с помощью ПЦР) можно обнаружить «диагностическое окно», которое образуется с момента инфицирования до первого появления анти-ВГС в крови.
ПЦР отличается гениальной простотой. В принципиальном плане это процесс, состоящий из 3 повторяющихся этапов.
1-й этап включает в себя денатурирование двойной нити ДНК с помощью нагревания. На 2-ом этапе происходит присоединение специфических нуклеотидов, в избытке добавляемых к полученной смеси и обозначаемых как «праймер», к разделенным комплементарным основаниям определенного участка гена. Таким образом, в этих участках ДНК вновь становится двунитчатой. На 3-ем этапе ДНК-полимераза распознает этот короткий двунитчатый участок, расценивает его как «сигнал к старту» и с помощью достраивания отдельных нуклеотидов комплементарно удлиняет праймер до двунитчатого.
Таким образом, после окончания 3-го этапа (что равносильно завершению 1-го цикла ПЦР) происходит удвоение ДНК между двумя праймера-ми. Такие циклы автоматически многократно повторяются. Это ведет к экспоненциальной амплификации исходной ДНК, ограниченной специфичными олигонуклеотидами (праймером). Выбранный участок генома, обозначаемый как конечная последовательность или эквивалент генома, умножается с помощью ПЦР с высокой чувствительностью. При исходной одной копии к концу 1-го цикла возникают 2 копии, к концу 2-го цикла — 4 копии, к концу 3-го цикла — 8 копий конечной последовательности. Через 30 циклов число копий достигает 1 млрд.!
Этот гениально простой метод амплификации гена, при котором умножается специфичный короткий участок ДНК из нескольких сотен нуклеотидов, однако, весьма уязвим.
Существенную проблему для этого высокочувствительного метода создает загрязнение материалом проведенных прежде реакций. Так, ПЦР может дать ложноположительные результаты, если несколько молекул ам-плификата загрязняют соответствующие химические вещества (буфер). В каждом случае наряду с проведением положительного контрольного исследования необходимо и проведение как минимум двух отрицательных контрольных исследований. Определенное значение имеет и пространственное разделение рабочих процессов.
Уязвимость этого метода (табл. 24) и его высокая стоимость в случаях повышенного уровня трансаминаз, но при отрицательных результатах определения анти-ВГС заставляют провести сначала повторное исследование активности трансаминаз и наличия анти-ВГС (см. выше). Применяя в настоящее время высокочувствительный ELISA-тест 2-го поколения у больных
Таблица 24
Применение ПЦР для обнаружения ВГС-РНК (ограниченные возможности метода)
(по Damen et al., 1996; Zaajer et ai., 1993)
16% достоверные
23-29% л ож ноотр и цател ь н ы е
55-61% ложноположительные и/или дожноотрицатедьные
с подозрением на острый гепатит без признаков иммуносупрессии, мы не находим показаний к проведению ПЦР для обнаружения ВГС-РНК. В связи с надежностью и высокой стоимостью ПЦР указанное обстоятельство, на наш взгляд, важно в практическом плане.
|
| Категорія: Гепатит і наслідки гепатиту | Додав: koljan
|
| Переглядів: 484 | Завантажень: 0
|
Додавати коментарі можуть лише зареєстровані користувачі. [ Реєстрація | Вхід ] |
|
|
